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超高效液相色谱法快速检测粮食中黄曲霉毒素的含量

[导读]本方法无需衍生即可同时测定粮食中4种黄曲霉毒素,适用于粮食中黄曲霉毒素的快速定量测定。

   黄曲霉毒素( Aflatoxins,AF) 是黄曲霉( Aspergillus flavus) 、寄生曲霉( A. parasiticus) 和模式曲霉( A. nomius) 等在合适的温度和湿度条件下产生的真菌毒素,对人畜有强烈的致病性、致癌性,严重危害人体健康,是危害最严重的真菌毒素,在自然界中广泛存在。污染粮食的黄曲霉毒素主要有B1B2,G1和G2。国内外非常重视黄曲霉毒素的防控,为控制黄曲霉毒素的污染,我国在2005 年颁布了粮食和食品中黄曲霉毒素B1( AFB1) 的限量标准, 2011 年最新颁布的国家食品安全标准《食品中真菌毒素限量》规定了玉米、玉米面( 渣、片) 及玉米制品中AFB1的最高限量为20 !g /kg,稻谷、糙米、大米中AFB1的最高限量为10 !g /kg,小麦、大麦、麦片、小麦粉、其它谷物及去壳谷物AFB1的最高限量为5 !g /kg。

   目前AF 的检测方法主要有薄层色谱法、胶体金试纸条法、酶联免疫法或免疫传感器、荧光光谱法、液相色谱法或液质联用法等方法。薄层色谱法由于操作复杂,目前应用较少,胶体金和酶联免疫方法用于快速筛查,普通液相色谱方法是目前应用最多的定量检测方法。由于黄曲霉毒素B1和G1接触水以后,会发生荧光猝灭现象,原有较强的荧光特性基本消失,很难用普通液相色谱测出来,分析时一般需要柱前或柱后衍生[11, 13, 18, 19],检测步骤增加,造成分析速度较慢,耗费有机溶剂较多,费时费力。当前急需建立一种更加灵敏、高效、低溶剂量、不需要衍生的微量黄曲霉毒素快速定量方法。根据范德米特( van Deemeter) 方程理论,随着液相色谱系统颗粒度的不断降低,色谱分离度不断提高。近年建立的填料粒径< 2 !m 的超高效液相色谱系统( UPLC) ,具有超高分离度、超快速度、超高灵敏度的特点,适于微量快速分析[20, 21]。

   本研究结合免疫亲和净化手段,基于UPLC 分离技术,建立了一种进样量小、分离度高、无需衍生、快速准确、环保的黄曲霉毒素定量分析方法,以满足当前绿色检验的需要。应用本方法对来自不同地区的30 份粮食样品( 稻谷、小麦、玉米) 进行了黄曲霉毒素的分析,仅有1 份玉米样品有污染,其AFB1含量为8. 04 ng /g,AFB2含量为0. 942 ng /g。实际样品分析结果表明,本方法能够满足对样品灵敏、快速、高通量、低溶剂的检测要求,适用于粮食中黄曲霉毒素快速定量测定。








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