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上海纤检凯氏定氮仪测定人血白蛋白中蛋白质含量的不确定度评价

[导读]测定总氮时样品的稀释和量取以及实际消 耗硫酸滴定液体积、测量重复性 、硫酸滴定液的浓度标定和稀释是凯氏定氮法测定人血白蛋白含量不确定度的主要因素, 通过分析上述不确定度分量对试验进行优化, 可使测定结果更加可靠。

蛋白质含量是人血白蛋白质量评价的重要指标。不确定度是与测量结果相关联的参数, 表征合理地赋予被测量值的分散性 。本文对凯氏定氮法测定人血白蛋白中蛋白质含量的不确定度来源和大小进行分析和评价, 并初步探讨在运用该方法的过程中应注意的问题, 旨在为人血白蛋白以及食品 (尤其是乳制品)中的蛋白质含量测定提供一定参考 。

实验材料及条件

1.1 仪器及试药

仪器 :自动定氮仪 (上海纤检仪器有限公司);玻璃仪器 (1、2、10 mL移液管;20、100 mL容量瓶;25 mL酸式滴定管 ), 20 ℃下校准 。

试药 :人血白蛋白 (贵阳黔峰生物制品有限公司生产 , 批号为 20070830, 规格为 20%, 10 g);0.005 mol·L-1硫酸滴定液 (本所化学室标定 );10%钨酸钠溶液 ;0.33 mol·L-1硫酸溶液 ;2%硼酸溶液 ;40%氢氧化钠溶液 ;甲基红-溴甲酚绿混合指示液;98%硫酸;无水硫酸钠 ;硫酸铜 。

1.2 实验室环境

温度变化范围:(20 ±4)℃。

步骤已省略

讨论

根据小分量不确定度不足最大分量不确定度的1/3时, 小分量不确定度可以忽略不计的原则[ 4], 由以上的评定结果可看出, 本方法测定结果的不确度主要来源于 6个分量 :测定总氮稀释样品的不确定度 u(VT1 / VT2 )、滴定总氮吸取样品的不确定度u(VT3 )、测量重复性 u(rep)、标定硫酸滴定液浓度的不确定度 u(CD)、滴定总氮实际消耗硫酸滴定液的不确定度 u(VT4 -V0 )、稀释硫酸滴定液的不确定度 u(VD1 / VD2 )。在试验中使用的玻璃仪器均为 A级 , 因此不能通过提高仪器的精密度改善结果, 但可采取下述2个措施降低本方法的不确定度 。

1)使用较大规格的移液管。 u(VT1 / VT2 )与u(VT3)较大的原因是 1.0 mL移液管引入的不确定度明显大于较大规格的移液管 。故在使用本方法测定样品时,在样品量允许的前提下,通过重新设计试验步骤 ,在吸取样品时选用较大规格的移液管 ,将能显著降低 u(VT1 / VT2 )与 u(VT3 )。

2)使用合适的自动化仪器进行样品消化及滴定,同时规范试验操作 ,严格控制试验条件 ,将能有效控制试验过程中产生的随机误差,从而降低 u(rep)。

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蛋白质含量是人血白蛋白质量评价的重要指标。不确定度是与测量结果相关联的参数, 表征合理地赋予被测量值的分散性 。本文对凯氏定氮法测定人血白蛋白中蛋白质含量的不确定度来源和大小进行分析和评价, 并初步探讨在运用该方法的过程中应注意的问题, 旨在为人血白蛋白以及食品 (尤其是乳制品)中的蛋白质含量测定提供一定参考 。

实验材料及条件

1.1 仪器及试药

仪器 :自动定氮仪 (上海纤检仪器有限公司);玻璃仪器 (1、2、10 mL移液管;20、100 mL容量瓶;25 mL酸式滴定管 ), 20 ℃下校准 。

试药 :人血白蛋白 (贵阳黔峰生物制品有限公司生产 , 批号为 20070830, 规格为 20%, 10 g);0.005 mol·L-1硫酸滴定液 (本所化学室标定 );10%钨酸钠溶液 ;0.33 mol·L-1硫酸溶液 ;2%硼酸溶液 ;40%氢氧化钠溶液 ;甲基红-溴甲酚绿混合指示液;98%硫酸;无水硫酸钠 ;硫酸铜 。

1.2 实验室环境

温度变化范围:(20 ±4)℃。

步骤已省略

讨论

根据小分量不确定度不足最大分量不确定度的1/3时, 小分量不确定度可以忽略不计的原则[ 4], 由以上的评定结果可看出, 本方法测定结果的不确度主要来源于 6个分量 :测定总氮稀释样品的不确定度 u(VT1 / VT2 )、滴定总氮吸取样品的不确定度u(VT3 )、测量重复性 u(rep)、标定硫酸滴定液浓度的不确定度 u(CD)、滴定总氮实际消耗硫酸滴定液的不确定度 u(VT4 -V0 )、稀释硫酸滴定液的不确定度 u(VD1 / VD2 )。在试验中使用的玻璃仪器均为 A级 , 因此不能通过提高仪器的精密度改善结果, 但可采取下述2个措施降低本方法的不确定度 。

1)使用较大规格的移液管。 u(VT1 / VT2 )与u(VT3)较大的原因是 1.0 mL移液管引入的不确定度明显大于较大规格的移液管 。故在使用本方法测定样品时,在样品量允许的前提下,通过重新设计试验步骤 ,在吸取样品时选用较大规格的移液管 ,将能显著降低 u(VT1 / VT2 )与 u(VT3 )。

2)使用合适的自动化仪器进行样品消化及滴定,同时规范试验操作 ,严格控制试验条件 ,将能有效控制试验过程中产生的随机误差,从而降低 u(rep)。

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