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饲料中粗脂肪含量的测定研究

[导读]通过对国标法酸水解法进行研究,发现在提取过程中用亚麻布进行过滤处理后进行提取最终测得的脂肪含量与国标法中饲料粗脂肪含量的测定结果基本相同

粗脂肪是饲料、动物组织以及动物排泄物中脂溶性物质的总称。在动物饲料中添加一定水平的粗脂肪,对动物的生长发育、维持生存具有重要作用。脂肪是动物贮存能量的最好形式,在营养缺乏时能分解为补充能量的需要,并且能供给必需的脂肪酸。根据相关文献[1-8],饲料粗脂肪含量的大小对动物的生长发育生育等方面具有相当重要作用。因此,为让动物达到最佳的发育水平,控制饲料中粗脂肪添加量尤为重要,我们可以通过检测饲料中粗脂肪含量来对饲料进行评估,作为判断饲料是否符合喂养提供重要参考。目前,饲料中粗脂肪的检验方法有酸水解法[10-11]、索氏抽提法[10-11]、滤袋法[12],而国家标准对饲料中粗脂肪的检测方法主要是预水解后进行索氏抽取[13](本文简称国标索氏抽提法), 该方法精确、稳定,但抽取筒价格昂贵,实验成本较高,实验过程较为繁琐。而国标法中食品中脂肪含量的酸水解测定法[14]操作简单方便,本文将对酸水解法进行综合研究,将其合理运用到饲料粗脂肪检测中;并且,从降低实验成本为出发点,对国标索氏抽提法进行研究。

结果与讨论

1 酸水解法在饲料中粗脂肪含量测定的运用

分别采用鸡饲料、猪饲料、草鱼饲料各一份按照国标酸水解法进行处理,发现在待吸取上层清液的步骤中,三种类别的饲料均出现分层不理想,饲料水解后颗粒飘浮在两层中,严重影响上清液的吸取。由于乙醇可促使蛋白质沉淀,促进脂肪球聚合,同时溶解一些碳水化合物如糖等,故实验在分层不理想的情况下再加入了适量的无水乙醇,震摇后静置发现分层效果仍不理想,再将处理液进行离心,分层仍达不到要求。故采取过滤的方法,先将分层不理想的处理液进行过滤,过滤后的液体分层明显,取上层清液,再用 30 mL 无水乙醚分三次冲洗滤渣,收集滤液,合并滤液和上清液于锥形瓶,按国标进行下一步操作。实验中分别采用了三种不同鸡饲料、三种不同猪饲料、三种不同草鱼饲料为样品,处理过程中分别采用定量滤纸和亚麻布进行过滤,采用配对样本 T 检验法对两种过滤介质最终测得脂肪含量与国标索氏抽提法分别进行比较研究,结果见表 1。由表 1 可见,采用亚麻布过滤最终测得粗脂肪含量与国标索氏抽提法测得含量的成对样本检验 Sig.值为 0.565,远远大于 0.05,故两种方法差异性不大,而采用定量滤纸过滤最终测得粗脂肪含量与国标索氏抽提法测得含量的成对样本检验 Sig.值为 0.000,小于 0.05,两种方法存在显著性差异,故不适合用定量滤纸做过过滤介质。

2 改进国标索氏抽提法

针对索氏抽提法中滤纸筒是一次性消耗品且价格昂贵这个问题,本文对此进行了改进,在转移滤渣的双纸滤纸时用定量滤纸将滤渣及双层滤纸包住后再放入滤纸筒,操作完成后取出滤纸,试样的残留物基本均留在滤纸上而滤纸筒仍保持干净。为验证该方法是否能增加滤纸筒的使用次数,本文采用了比对试验求证,样品采用两种不同鸡饲料(记为试样 1、2),两种不同鸭饲料(记为3、4),两种不同甲鱼饲料(记为 5、6)。

从表 2 可以看出,经过改进后,滤纸筒一直重复使用 15 次,测得的饲料中粗脂肪含量均与国标法直接测定得出含量相近。再对试样 5 试验结果进行 t 检验,得到表 3 和表 4,经过改进后的索氏抽提法,滤纸筒重复使用的 15 次间,平均值为 7.21%,标准差为 0.03,说明滤纸筒重复使用的过程中测得的数据偏差小,重复性好;经过 t 检验后发现 Sig=0.000<0.05,说明改进后索氏抽提法对测定饲料中脂肪含量有显著性的影响。

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粗脂肪是饲料、动物组织以及动物排泄物中脂溶性物质的总称。在动物饲料中添加一定水平的粗脂肪,对动物的生长发育、维持生存具有重要作用。脂肪是动物贮存能量的最好形式,在营养缺乏时能分解为补充能量的需要,并且能供给必需的脂肪酸。根据相关文献[1-8],饲料粗脂肪含量的大小对动物的生长发育生育等方面具有相当重要作用。因此,为让动物达到最佳的发育水平,控制饲料中粗脂肪添加量尤为重要,我们可以通过检测饲料中粗脂肪含量来对饲料进行评估,作为判断饲料是否符合喂养提供重要参考。目前,饲料中粗脂肪的检验方法有酸水解法[10-11]、索氏抽提法[10-11]、滤袋法[12],而国家标准对饲料中粗脂肪的检测方法主要是预水解后进行索氏抽取[13](本文简称国标索氏抽提法), 该方法精确、稳定,但抽取筒价格昂贵,实验成本较高,实验过程较为繁琐。而国标法中食品中脂肪含量的酸水解测定法[14]操作简单方便,本文将对酸水解法进行综合研究,将其合理运用到饲料粗脂肪检测中;并且,从降低实验成本为出发点,对国标索氏抽提法进行研究。

结果与讨论

1 酸水解法在饲料中粗脂肪含量测定的运用

分别采用鸡饲料、猪饲料、草鱼饲料各一份按照国标酸水解法进行处理,发现在待吸取上层清液的步骤中,三种类别的饲料均出现分层不理想,饲料水解后颗粒飘浮在两层中,严重影响上清液的吸取。由于乙醇可促使蛋白质沉淀,促进脂肪球聚合,同时溶解一些碳水化合物如糖等,故实验在分层不理想的情况下再加入了适量的无水乙醇,震摇后静置发现分层效果仍不理想,再将处理液进行离心,分层仍达不到要求。故采取过滤的方法,先将分层不理想的处理液进行过滤,过滤后的液体分层明显,取上层清液,再用 30 mL 无水乙醚分三次冲洗滤渣,收集滤液,合并滤液和上清液于锥形瓶,按国标进行下一步操作。实验中分别采用了三种不同鸡饲料、三种不同猪饲料、三种不同草鱼饲料为样品,处理过程中分别采用定量滤纸和亚麻布进行过滤,采用配对样本 T 检验法对两种过滤介质最终测得脂肪含量与国标索氏抽提法分别进行比较研究,结果见表 1。由表 1 可见,采用亚麻布过滤最终测得粗脂肪含量与国标索氏抽提法测得含量的成对样本检验 Sig.值为 0.565,远远大于 0.05,故两种方法差异性不大,而采用定量滤纸过滤最终测得粗脂肪含量与国标索氏抽提法测得含量的成对样本检验 Sig.值为 0.000,小于 0.05,两种方法存在显著性差异,故不适合用定量滤纸做过过滤介质。

2 改进国标索氏抽提法

针对索氏抽提法中滤纸筒是一次性消耗品且价格昂贵这个问题,本文对此进行了改进,在转移滤渣的双纸滤纸时用定量滤纸将滤渣及双层滤纸包住后再放入滤纸筒,操作完成后取出滤纸,试样的残留物基本均留在滤纸上而滤纸筒仍保持干净。为验证该方法是否能增加滤纸筒的使用次数,本文采用了比对试验求证,样品采用两种不同鸡饲料(记为试样 1、2),两种不同鸭饲料(记为3、4),两种不同甲鱼饲料(记为 5、6)。

从表 2 可以看出,经过改进后,滤纸筒一直重复使用 15 次,测得的饲料中粗脂肪含量均与国标法直接测定得出含量相近。再对试样 5 试验结果进行 t 检验,得到表 3 和表 4,经过改进后的索氏抽提法,滤纸筒重复使用的 15 次间,平均值为 7.21%,标准差为 0.03,说明滤纸筒重复使用的过程中测得的数据偏差小,重复性好;经过 t 检验后发现 Sig=0.000<0.05,说明改进后索氏抽提法对测定饲料中脂肪含量有显著性的影响。

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