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分光光度法和酶标法测量饲料中总磷的比较

[导读]酶标仪同样可以用于饲料及原料中总磷的检测,酶标仪在0~750 mg/L的线性范围内,405 nm的波长下,加样量200μL,检测饲料总磷标准曲线具有良好的线性关系,同时用于总磷测定中具有高精密度、高稳定性、高准确度。与分光光度计相比,其优势更突出:加样少、测定孔多、速度快、安全便捷,

通过标准曲线的绘制,在含磷量0~750μg的范围内,分光光度计400 nm波长下和酶标仪405 nm波长下的标准曲线均具有非常良好的线性关系(R2=0.999 9)。国标GBT 6437—2018中,要求当总磷量小于0.5%时,两平行结果绝对差值不得超过算术平均值的10%,当总磷量大于0.5%时,则不得超过算术平均值3%。在精密度试验中,酶标仪检测结果显示最大相对偏差均在3%以内,可见酶标仪检测方法具有较高的稳定性;此外其标准误较低,均低于0.03(均值0.015),可见酶标仪的检测方法其精密度较高。但当原料中磷含量超过2%时,其标准误明显高于其他组,可见当样品中磷含量较高时,其酶标仪的检测方法精密度有所下降,其原因可能包括:含磷量高,用于测定的灰分样品比较多,可能出现加酸消解不完全,磷元素分布不均匀,造成误差;由于显色反应的待测液中含磷量过高,偏离了仪器量程中心位置,导致出现系统误差。通过比较2种仪器结果的显著性分析,可看出2种方法检测饲料总磷的结果无显著性差异(P>0.05),可见酶标仪在405 nm的波长与分光光度计400 nm的波长下检测饲料总磷结果差异不显著。通过19种原料和成品的分光光度计和酶标仪的检测结果比较,酶标仪的检测结果与分光光度计的结果相比较,其相对误差在基本都在5%以内,均值2.87%,证明多功能酶标仪检测总磷在0~750 mg/L的线性范围内具有良好的准确度。在实际操作中,分光光度计一次只能测定8个样品,在加样时需要用待测样品多次润洗并要擦拭比色皿表面的水分,消耗时间且不易操作,用完后仍需要多次用水清洗且易存在残留,导致出现误差。酶标仪可一次性检测至少90个样品,每次加入测定样只需要用移液器快速加入200μL,用量少,容易控制显色反应的时间,减少由于显色时间增加导致吸光值降低的情况。酶标仪为垂直光,受液体浓度影响小、显色更稳定,并且容易清洗、易干燥、不易有残留、操作难度小、快速简便,与分光光度计法相比大大缩短了检测时间,实用性强。多功能酶标仪检测总磷的注意事项:酶标板本身有一定的背景吸收,在检测中应先测定空白板的空白值,再检测样品吸光值,并在计算中减去相应的空白值得到校正吸光值,减少仪器误差,同时用于检测的酶标板要干燥无污染。在样品处理时,部分样品如浓缩饲料、复合预混料等颗粒大小不均匀,直接用于测定检测结果会失真,应粉碎至40目以上,混合均匀再测定。显色过程中,要保证样品显色反应时间一致为10 min,冬天温度低可以适当延长反应时间,单次同时检测最适合为8个样品,按顺序加入钒钼酸铵定容后,先测定前4个样品,再测定后4个样品,尽量保持显色时间一致。酶标仪检测为垂直光线检测,测定液体积厚度对结果影响比较大。加入酶标板样品量只需要200μL,过多或过少会影响结果准确度。因此使用移液枪往酶标板加样时应从同一个方向打入,保证液面同一水平,防止挂壁和喷溅。

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